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注：終止液和顯色劑具有腐蝕性，一旦接觸到液體，請盡快用大量清水沖洗。
產品介紹 Human Leptin ELISA Kit (Human Leptin Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人瘦素 ELISA 試劑盒，可以定量檢測人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本中的天然和重組 Leptin 濃度。人瘦素蛋白是一種分子量為16 kDa，長度為146個氨基酸殘基，具有強親水性的非糖基化多肽，主要參與調節脂肪組織體積和能量平衡。成熟的人瘦素分別與小鼠和大鼠瘦素蛋白有87％和84％的同源性，已發現人瘦素在小鼠和大鼠系統中起作用。瘦素的表達是非常有限的，它主要由白色脂肪組織產生。白色脂肪組織分泌瘦素與體內脂肪含量成正比，機體的體脂量是影響瘦素分泌的主要因素。此外，能量攝入的改變、睡眠、體溫、性別、自身的晝夜節律性、其它激素等均可影響其分泌和表達。一般來說，正常的血液中瘦素水平已發現的低于納克/毫升濃度。Leptin受體OB-R是Leptin作用于下丘腦的一座橋梁，Leptin通過下丘腦的特定受體抑制攝食、增加能量消耗，在脂肪蓄積、體重調節中起著重要作用。Leptin在血漿中的水平與脂肪組織量大小相關，當人和鼠體重下降時，Leptin在血漿中的水平也隨之會下降。瘦素主要通過抑制食欲，減少能量攝入；增加能量消耗；抑制脂肪合成3種途徑調節機體脂肪的沉積、代謝，減輕體重。其中，前兩條途徑主要通過瘦素與其下丘腦的受體結合發揮其中樞作用而實現的。隨著LPR被發現廣泛分布在各外周組織，后一途徑就可能與它的外周作用有關。作為一種激素，瘦素具有抑制攝食，促進能量消耗，調節代謝，影響激素分泌、生殖、免疫和血管增生等廣泛的生物學作用，而這些作用的發揮需要與其特異的受體結合。改變循環瘦素水平可用來研究動脈粥樣硬化，生長激素缺乏癥，和飲食失調如神經性厭食癥。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中人Leptin 濃度。在人Leptin單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的Leptin會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人Leptin抗體，抗人Leptin抗體與結合在單抗上的人Leptin結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有Leptin，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現藍色；加終止液變為黃色。在450 nm下測OD值，人Leptin濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中人Leptin濃度。
UE-H6133S/H6133M/H6133L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現規則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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